هورمون گنادوتروپین جفتی انسان (hCG) گلیکوپروتئینی با دو زنجیره آلفا و بتا است که زنجیره بتا ویژگی‌های اختصاصی این هورمون را تعیین می‌کند. hCG پس از لقاح توسط سلول‌های تروفوبلاست ترشح میشود و با حفظ جسم زرد، تولید پروژسترون و استروژن را تقویت کرده و شرایط لازم برای لانه‌گزینی و تداوم بارداری را فراهم می‌سازد. مهم‌ترین کاربرد بالینی این هورمون، تأیید بارداری است. همچنین اندازه‌گیری hCG در تعیین سن بارداری، تشخیص بارداری خارج‌رحمی، احتمال سقط و مسمومیت بارداری مؤثر است. در بارداری‌های غیرطبیعی، غلظت این هورمون کمتر از حد طبیعی است. از سوی دیگر، افزایش hCG در برخی تومورها مانند مول هیداتیدی، کوریوکارسینوما و تومورهای تخمدان، بیضه، پستان، ریه و غیره مشاهده میشود، لذا سنجش آن در تشخیص و پیگیری درمان این بیماری‌ها اهمیت دارد.
کیت Gold Medi Test Plus به روش الایزا برای سنجش کمی هورمون گنادوتروپین جفتی انسان (B-hCG) در نمونه‌های سرم یا پلاسما طراحی شده است. این کیت برای استفاده تشخیصی In Vitro و بررسی وضعیت بارداری و برخی بیماری‌های مرتبط با هورمون B-hCG به‌کار می‌رود. روش ساندویچی ایمونوآنزیماتیک با استفاده از آنتی‌بادی‌های مونوکلونال، دقت بالای آزمایش را تضمین می‌کند.
این کیت الایزا برای تایید بارداری، تعیین تقریبی سن بارداری، شناسایی بارداری خارج رحمی، بررسی احتمال وقوع سقط، و پیگیری تومورهای تروفوبلاستیک و مول هیداتیفورم استفاده میشود. همچنین در ارزیابی پاسخ به درمان بیماری‌های مرتبط با افزایش یا کاهش غیرطبیعی hCG کاربرد دارد.
یک چاهک برای کنترل، پنج چاهک برای استانداردها و به تعداد نمونه‌ها، چاهک در نظر بگیرید. بقیه چاهک‌ها را با رطوبت‌گیر داخل کیسه مخصوص قرار دهید و درب آن را ببندید. بهتر است استانداردها دوتایی تست شوند.
۵۰ میکرولیتر از نمونه، استاندارد و کنترل به چاهک‌ها اضافه کنید. برای هرکدام از سرسمپلر جداگانه استفاده شود.
۵۰ میکرولیتر از بافر سنجش به همه چاهک‌ها اضافه و پلیت را ۱۰ ثانیه آرام تکان دهید.
پلیت را با برچسب بپوشانید و به مدت ۵ دقیقه در دمای اتاق (20–25°C) انکوبه کنید.
۵ بار با ۳۰۰–۳۵۰ میکرولیتر محلول شستشو، چاهک‌ها را شستشو دهید (۲۰–۴۰ ثانیه در هر بار). سپس با ضربه روی دستمال، رطوبت را خارج کنید.
افزودن کونژوگه HRP: ۱۰۰ میکرولیتر از کونژوگه را به همه چاهک‌ها اضافه کرده و ۳۰ ثانیه آرام شیک کنید.
پلیت را مجدداً ۵ دقیقه در دمای اتاق انکوبه نمایید.
همانند مرحله ۵ عمل شستشو را تکرار کنید.
افزودن محلول رنگزا (TMB): ۱۰۰ میکرولیتر از محلول TMB به چاهک‌ها اضافه نمایید.
پلیت را ۵ دقیقه در دمای اتاق و دور از نور انکوبه کنید تا واکنش آنزیمی ایجاد رنگ آبی انجام شود.
۵۰ میکرولیتر از محلول توقف‌کننده را به هر چاهک اضافه کرده و به آرامی مخلوط کنید. رنگ آبی به زرد تغییر می‌کند.
پلیت را در طول موج ۴۵۰ نانومتر و مرجع ۶۳۰ نانومتر خوانش نمایید. این کار را حداکثر تا ۱۰ دقیقه پس از توقف واکنش انجام دهید.
در افراد سالم غیر حامله غلظت سرمی hCG معمولا کمتر از 5mIU٫ml است. در بارداری طبیعی داخل رحمی 1٫5-1 هفته بعد از لقاح غلظت hCG قابل اندازه گیری و حدود 1 ml٫ml میباشد غلظت این هورمون در طول 6 هفته اول حاملگی هر 3-1٫5 روز دو برابر میشود در اواخر سه ماهه اول حاملگی غلظت hCG به بالاترین میزان خود حدود 100000 میرسد. سپس از اوایل سه ماهه دوم حاملگی میزان آن به آرامی کاهش می یابد. لازم به ذکر است که غلظت این هورمون در موارد حاملگیهای دوقلو یا چند قلو تقریبا دو برابر می باشد. در حاملگی خارج رحمی غلظت این هورمون نسبت به حاملگی طبیعی داخل رحمی پایین تر میباشد نمونه های با غلظت BhCG در محدوده 510U٫ml مشكوك
به حاملگی تلقی شده و تکرار تست بعد از 48 ساعت توصیه می گردد. نمونه هایی که غلظت HCG در آنها بیش از 25mIU٫ml باشند مثبت تلقی می شوند. در حاملگی های طبیعی داخل رحمی میزان BhCG گزارش شده در کتب مرجع به شرح ذیل است:
| هفته بعد آخرین دوره قاعدگی
(Last menstrual Period) |
هفته بعد از باروری | محدوده غلظت
mlU٫ml |
| 4 | 2 | 5-100 |
| 5 | 3 | 200-300 |
| 6 | 4 | 10000-80000 |
| 7-14 | 5-12 | 90000-500000 |
| 15-26 | 13-24 | 5000-80000 |
| 27-40 | 26-38 | 3000-15000 |
قابل ذکر است جدول فوق یک راهنمای کلی است و توصیه می گردد هر آزمایشگاهی با اندازه گیری غلظت BhCG افراد سالم و باردار، مقادیر طبیعی بازه مرجع خود را تعیین و از آن برای تفسیر نتایج استفاده نماید. محدوده قابل اندازه‌گیری غلظت BhCG با این کیت 11000000 میباشد.
