کیت کمی اندازه گیری Free PSA در سرم یا پلاسما ابزاری تشخیصی برای سنجش دقیق فرم آزاد آنتیژن اختصاصی پروستات میباشد. PSA یک گلیکوپروتئین آنزیمی است که توسط سلولهای اپیتلیال غده پروستات ترشح میشود و در خون به دو شکل متصل به پروتئینها (Bound PSA) و آزاد (Free PSA) وجود دارد.
از نظر بالینی، Free PSA اهمیت ویژهای در افتراق بیماریهای خوشخیم و بدخیم پروستات دارد. در سرطان پروستات، معمولاً سهم PSA آزاد کاهش یافته و درصد بیشتری از PSA بهصورت متصل در گردش خون دیده میشود، در حالی که در بزرگشدگی خوشخیم پروستات، مقدار Free PSA نسبتاً بالاتر است.
اندازهگیری Free PSA بههمراه Total PSA و محاسبه نسبت آنها، نقش مهمی در کاهش انجام بیوپسیهای غیرضروری، افزایش دقت تشخیص سرطان پروستات و بهبود تصمیمگیریهای بالینی ایفا میکند. این شاخص بهویژه در بیمارانی که Total PSA آنها در محدوده خاکستری قرار دارد، ارزش تشخیصی بالایی دارد.
کیت الایزای Free PSA با فراهمکردن اندازهگیری دقیق و قابل اعتماد، ابزار مؤثری در غربالگری، تشخیص افتراقی، پایش بیماری و ارزیابی پاسخ به درمان در بیماران مبتلا به اختلالات پروستات محسوب میشود و در کنار سایر یافتههای بالینی و پاراکلینیکی، به پزشک در تفسیر صحیح وضعیت بیمار کمک مینماید.
کیت کمی اندازهگیری Free PSA با نام تجاری Gold Medi Test Plus به روش ELISA طراحی شده و امکان سنجش دقیق غلظت آنتیژن اختصاصی پروستات آزاد (Free Prostate Specific Antigen) را در نمونههای سرم یا پلاسمای انسان فراهم میکند. این کیت برای استفاده تشخیصی In Vitro در ارزیابی بیماریهای مرتبط با غده پروستات کاربرد دارد و با بهرهگیری از روش ساندویچی ایمونوآنزیماتیک و آنتیبادیهای اختصاصی، دقت و صحت نتایج آزمایشگاهی را تضمین مینماید.
این کیت الایزا بهطور ویژه برای تشخیص افتراقی بین سرطان پروستات و بزرگشدگی خوشخیم پروستات (BPH) مورد استفاده قرار میگیرد. اندازهگیری Free PSA، بهویژه در کنار Total PSA و محاسبه نسبت Free PSA به Total PSA، ابزار ارزشمندی برای کاهش نتایج مثبت کاذب PSA و کمک به تصمیمگیری در خصوص انجام بیوپسی پروستات محسوب میشود. همچنین این تست در پایش وضعیت بیماران مبتلا به بیماریهای پروستات کاربرد دارد.
یک چاهک برای کنترل، چند چاهک برای استانداردها و به تعداد نمونهها، چاهک در نظر بگیرید.
بقیه چاهکها را همراه با رطوبتگیر داخل کیسه مخصوص قرار داده و درب آن را ببندید. بهتر است استانداردها و نمونهها بهصورت دوتایی تست شوند.
قبل از شروع آزمایش، اجازه دهید تمامی معرفها به دمای اتاق (20–28°C) برسند. بافر شستشوی غلیظ را از نظر وجود کریستال بررسی کرده و در صورت مشاهده، با گرمکردن در ۳۷ درجه سانتیگراد آن را حل نمایید.
محلول شستشو را با رقیقسازی یک حجم بافر غلیظ (20X) در ۱۹ حجم آب مقطر یا دیونیزه و در ظروف تمیز آماده کنید. سایر معرفها آماده مصرف هستند.
۵۰ میکرولیتر از نمونه، استاندارد و کنترل را به چاهکهای مربوطه اضافه نمایید.
برای هر نمونه و استاندارد از سرسمپلر جداگانه یکبارمصرف استفاده شود تا از آلودگی متقاطع جلوگیری گردد.
۱۰۰ میکرولیتر از کونژوگه آنزیمی (HRP-Anti-PSA) به تمامی چاهکها اضافه کرده و پلیت را حدود ۳۰ ثانیه بهآرامی تکان دهید تا محتویات مخلوط شوند.
پلیت را با برچسب مخصوص پوشانده و به مدت ۴۵ دقیقه در دمای اتاق (20–28°C) انکوبه نمایید.
محتویات چاهکها را تخلیه کرده و چاهکها را ۵ بار با ۳۵۰ میکرولیتر محلول شستشوی آماده مصرف شستشو دهید.
در هر بار پس از افزودن محلول، چاهکها را خالی کرده و در پایان با ضربات ملایم روی کاغذ جاذب، مایع باقیمانده را خارج نمایید.
۱۰۰ میکرولیتر از محلول سوبسترا (TMB) به تمامی چاهکها اضافه نمایید.
پلیت را به مدت ۱۵ دقیقه در دمای اتاق و در تاریکی انکوبه کنید تا واکنش آنزیمی ایجاد رنگ آبی انجام شود.
۵۰ میکرولیتر از محلول توقفکننده را به هر چاهک اضافه کرده و بهآرامی مخلوط نمایید تا رنگ آبی به زرد تغییر کند.
جذب نوری چاهکها را در طول موج ۴۵۰ نانومتر و در صورت امکان با مرجع ۶۳۰ نانومتر قرائت نمایید. این کار باید حداکثر تا ۱۰ دقیقه پس از توقف واکنش انجام شود.
مقدار Free PSA و بهویژه نسبت Free PSA به Total PSA در تفسیر بالینی اهمیت دارد.
کاهش این نسبت معمولاً با افزایش احتمال بدخیمی پروستات همراه است، در حالی که نسبتهای بالاتر بیشتر به نفع هیپرپلازی خوشخیم پروستات میباشند. توصیه میشود هر آزمایشگاه با توجه به جمعیت مرجع خود، بازههای مرجع اختصاصی را تعیین و در گزارشدهی لحاظ نماید.
